病理科组织切片、染色程序及质量控制

作者:时间:2017-06-30点击数:

1、石蜡切片程序及质量控制

组织包埋后必须切成薄片,再贴到载玻片上。需使用的设备:切片机、切片刀、水浴锅或捞烤片机等。切片机多为轮转式,也有滑动式石蜡切片机。切片机的寿命一般都比较长。切片刀有随机配备的厚金属刀和一次性的刀架、刀片。前者允许用户多次的磨用,但价格比较贵。提倡使用高档切片机和一次性刀架、刀片,工作质量更好!(塑料包埋块用玻璃刀和钻石刀切片,玻璃刀可以切大约1μm厚度的切片)。组织切片是一门精细的技术,需要花费一定的时间练习,才能熟练掌握这门技术。刀不快时切片会发生卷起,皱缩,或切片不能形成蜡带。

石蜡切片质量控制:

(1)切片前首先装好切片刀,把刀牢牢固定,否则,切片中就会发生许多人为现象。(最常见的人为现象是波纹,厚薄不均等)。

(2)蜡块装到切片机的蜡块夹上,夹持要平稳牢固。调整好蜡块的方位,不能偏斜,刀刃与蜡块的上、下缘平行。切片刀与蜡块的平面之间应保持一定的角度(清除角),一般为3~8度,以免刀刃面将组织刮坏。

(3)修蜡块时要循序渐进,力争修出最大面,又要防止小组织被修坏、修光。

(4)切片时连续转动手轮,用力要平稳、均匀。常规切片厚3~5μm。

(5)切下的蜡片相连成带状。待蜡带切至一定长度时,右手用镊子夹住蜡片末端,左手持毛笔轻轻将蜡带的另一端与切片刀拨离。

(6)将蜡片较光滑的一面朝下置于温水中(通常捞片水温在42℃左右),并用镊子帮助展开,去除皱纹后,选择完整、无划痕、厚薄均匀的蜡片,附贴到载玻片上。

(7)附贴时,务使蜡片与玻片之间无气泡。玻片一端应留有1/3的位置贴号码标签用。将蜡片附贴在另外2/3的中心位置。

(8)切片放入62℃烤箱中约30~60分钟烤片,以免发生脱片。为了防止脱片可以选用涂甘油蛋清片和挂胶片。比较常用的挂胶片有明胶片,APES胶片和多聚赖氨酸胶片等,免疫组化染色尤需要使用胶片。

2、冷冻切片程序及质量控制

在手术过程中,外科大夫为了明确手术切除标本的性质及病变。通常送新鲜组织做冷冻切片病理检查,由病理医师在短时间内(一般30分钟左右)做出病理诊断。外科医生根据病理诊断,决定手术切除范围。冷冻切片需要一台具有冷冻功能的切片机。常用冷冻切片机有以下几种类型:①恒冷式冷冻切片机,切片机装在恒冷柜内,恒冷柜内的温度大约-20~-30℃。②二氧化碳冷冻切片机和③半导体冷冻切片机,该机在冬春秋季一般应用还可以,只是在炎热的夏天受气温的影响,很难切出高质量的切片。只有在房间内按装一台功率略大一点的空调,气温高的问题可以得到一定的解决。(二级医院,无冰冻切片机者,可以使用“超声波快速组织处理仪”做快速石蜡切片诊断,代替冷冻,一般50分钟左右可以出报告)。

冷冻切片质量控制:

(1)选取适当的新鲜组织块,放在冷冻托上,放入冷冻切片机中冻透。

(2)修块、切片。冷冻切片通常厚6~8μm并把切片贴于载玻片上。

(3)在酒精灯上轻烤片刻,放入固定液中2分钟。

(4)然后快速HE染色(可在酒精灯上加热进行,以缩短时间)。

(5)封片、贴标签后,送诊断室(20分钟之内完成)。

3HE染色程序及注意事项:

(1)组织经过石蜡包埋切片后,因含蜡的切片无法进行染色,必须反向脱去切片上组织中的蜡,让水溶性染料渗入切片中。所以在染色前必须用二甲苯或替换剂进行彻底脱蜡,然后用乙醇洗,最后再用水洗。即组织切片→二甲苯→乙醇(无水乙醇,95%......50% )→水。人们通常把这个过程叫做切片脱蜡至水。

(2)含有升汞的固定液固定的组织切片,在脱蜡后须用0.5%碘酒精处理5~15分钟,去除切片内的汞盐沉淀。水洗后用5%硫代硫酸钠水溶液处理2~5分钟脱去碘色,再经流水充分水洗。

(3)固定在福尔马林液中时间较久的组织,易产生黑褐色结晶状色素,影响切片染色结果。故含此色素的切片,在脱蜡水化后,可用下列方法去除该色素。

a)氨水-双氧水浸泡法:将切片浸入氨水-双氧水溶液(3%双氧水25ml,加浓氨水1~2滴),1~2小时后充分水洗。

b)氨水酒精浸泡法:将切片浸入氨水酒精溶液(75%酒精100ml加浓氨水0.5ml)中,半小时后充分水洗。

c)碱酒精浸泡法:将切片浸入碱酒精液(75%酒精100ml加1%氢氧化钠1ml)中,10分钟后充分水洗。

染色注意事项:

a)配制染液和其他溶液时,要根据需要和染液的保存期限决定配制数量。

b)需要保存再用的染液和试剂,必须贴上标签,注明名称、浓度、配制日期和用处等,妥善存放。经常使用的染液和试剂要经常过滤或更换新液。

c)染色器皿须洗涤干净。必要时用酸洗液处理。将玻璃器皿浸泡于酸洗液中半天至1天,自来水冲洗数小时,再用洗涤剂刷洗,自来水冲洗数小时,蒸馏水冲洗后备用。(酸洗液配制:重铬酸钾300g,硫酸300ml,蒸馏水(可用自来水)3000ml。先将重铬酸钾溶解在蒸馏水中,徐徐加入硫酸。注意:加酸时必须缓慢!并用玻璃棒不停地搅拌!)

d)盖玻片使用前清洁处理,方法为:(a).自来水冲洗一遍。(b).逐片放入酸洗液内浸泡数小时。(c).自来水流水冲洗数小时。(d).95%酒精浸泡1小时以上,擦净备用。

染色是利用染料的不同作用,使组织与染料以不同方式进行结合。常规染色是苏木精和伊红染色(简称HE染色)。特殊染色是根据诊断的需要对组织中的某些成分进行非常规的染色。冷冻切片也用HE染色。少量或单个冷冻切片时手工操作比较方便。冷冻切片染染色要求在短时间(10~15分钟)内完成,在保证质量的前提下!越快越好。

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