抗生物素-生物素-过氧化酶复合物技术称为ABC法,步骤为一抗 + 生物素标记二抗 + ABC复合物(亲和素 - HRP标记生物素)+ HRP底物显色。
操作方法
1.切片经二甲苯Ⅰ5分钟;
2.切片经二甲苯Ⅱ5分钟;
3.无水酒精Ⅰ30秒;
4.无水酒精Ⅱ30秒;
5.95%酒精Ⅰ30秒;
6.95%酒精Ⅱ30秒;
7.90%酒精30秒;
8.80%酒精30秒;
9.70%酒精30秒;
10.自来水洗(1~10称为脱蜡至水);
11.0.3%H2O2甲醇处理切片10~20分钟;
12.水洗;
13.抗原修复;
14.PBS洗3次,1分钟/次;
15.加入血清孵育20分钟;
16.摔干血清,加入一抗60分钟;
17.PBS洗3次,2分钟/次;
18.加入二抗孵育30分钟;
19.PBS洗3次,2分钟/次;
20.加入ABC复合物,孵育30分钟;
21.PBS洗3次,2分钟/次;
22.DAB-H2O2孵育切片5~10分钟;
23.PBS洗,水洗;
24.Harris苏木素染核5~10分钟;
25.水洗,分化,蓝化,脱水,透明并封固;
ABC法的评价
敏感性强:ABC法比PAP法敏感性高20~40倍。
特异性强,背景染色淡:由于敏感性高,一抗和二抗都可被稀释至可能的浓度,减少了非特异染色。
方法简便,节约时间,可由PAP法所需的2天缩短至几个小时。
由于生物素与抗生物素具有与多种示踪物结合的能力,可用于双重或多重免疫。