抗生物素-生物素-过氧化酶复合物技术称为ABC法，步骤为一抗 + 生物素标记二抗 + ABC复合物(亲和素 - HRP标记生物素)+ HRP底物显色。

操作方法

1.切片经二甲苯Ⅰ5分钟；

2.切片经二甲苯Ⅱ5分钟；

3.无水酒精Ⅰ30秒；

4.无水酒精Ⅱ30秒；

5.95%酒精Ⅰ30秒；

6.95%酒精Ⅱ30秒；

7.90%酒精30秒；

8.80%酒精30秒；

9.70%酒精30秒；

10.自来水洗（1～10称为脱蜡至水）；

11.0.3%H₂O₂甲醇处理切片10～20分钟；

12.水洗；

13.抗原修复；

14.PBS洗3次，1分钟/次；

15.加入血清孵育20分钟；

16.摔干血清，加入一抗60分钟；

17.PBS洗3次，2分钟/次；

18.加入二抗孵育30分钟；

19.PBS洗3次，2分钟/次；

20.加入ABC复合物,孵育30分钟；

21.PBS洗3次，2分钟/次；

22.DAB-H2O2孵育切片5～10分钟；

23.PBS洗，水洗；

24.Harris苏木素染核5～10分钟；

25.水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固；

ABC法的评价

• 敏感性强：ABC法比PAP法敏感性高20～40倍。

• 特异性强，背景染色淡：由于敏感性高，一抗和二抗都可被稀释至可能的浓度，减少了非特异染色。

• 方法简便,节约时间，可由PAP法所需的2天缩短至几个小时。

• 由于生物素与抗生物素具有与多种示踪物结合的能力，可用于双重或多重免疫。