HE染色程序及注意事项

作者:时间:2017-08-16点击数:

1)组织经过石蜡包埋切片后,因含蜡的切片无法进行染色,必须反向脱去切片上组织中的蜡,让水溶性染料渗入切片中。所以在染色前必须用二甲苯或替换剂进行彻底脱蜡,然后用乙醇洗,最后再用水洗。即组织切片→二甲苯→乙醇(无水乙醇,95%......50% )→水。人们通常把这个过程叫做切片脱蜡至水。

(2)含有升汞的固定液固定的组织切片,在脱蜡后须用0.5%碘酒精处理5~15分钟,去除切片内的汞盐沉淀。水洗后用5%硫代硫酸钠水溶液处理2~5分钟脱去碘色,再经流水充分水洗。

(3)固定在福尔马林液中时间较久的组织,易产生黑褐色结晶状色素,影响切片染色结果。故含此色素的切片,在脱蜡水化后,可用下列方法去除该色素。

a)氨水-双氧水浸泡法:将切片浸入氨水-双氧水溶液(3%双氧水25ml,加浓氨水1~2滴),1~2小时后充分水洗。

b)氨水酒精浸泡法:将切片浸入氨水酒精溶液(75%酒精100ml加浓氨水0.5ml)中,半小时后充分水洗。

c)碱酒精浸泡法:将切片浸入碱酒精液(75%酒精100ml加1%氢氧化钠1ml)中,10分钟后充分水洗。

染色注意事项:

a)配制染液和其他溶液时,要根据需要和染液的保存期限决定配制数量。

b)需要保存再用的染液和试剂,必须贴上标签,注明名称、浓度、配制日期和用处等,妥善存放。经常使用的染液和试剂要经常过滤或更换新液。

c)染色器皿须洗涤干净。必要时用酸洗液处理。将玻璃器皿浸泡于酸洗液中半天至1天,自来水冲洗数小时,再用洗涤剂刷洗,自来水冲洗数小时,蒸馏水冲洗后备用。(酸洗液配制:重铬酸钾300g,硫酸300ml,蒸馏水(可用自来水)3000ml。先将重铬酸钾溶解在蒸馏水中,徐徐加入硫酸。注意:加酸时必须缓慢!并用玻璃棒不停地搅拌!)

d)盖玻片使用前清洁处理,方法为:(a).自来水冲洗一遍。(b).逐片放入酸洗液内浸泡数小时。(c).自来水流水冲洗数小时。(d).95%酒精浸泡1小时以上,擦净备用。

染色是利用染料的不同作用,使组织与染料以不同方式进行结合。常规染色是苏木精和伊红染色(简称HE染色)。特殊染色是根据诊断的需要对组织中的某些成分进行非常规的染色。冷冻切片也用HE染色。少量或单个冷冻切片时手工操作比较方便。冷冻切片染染色要求在短时间(10~15分钟)内完成,在保证质量的前提下!越快越好。

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